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如何优化显微镜的分辨率

浏览数量: 0     作者: 本站编辑     发布时间: 2020-07-11      来源: 本站

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显微镜作为测试设备的主要设备之一,并判断显微镜绩效的重要指标是解决方案。分辨率是指可以明确区分的两个小点或两条线之间的最小距离。人眼本身就是显微镜。在标准的照明条件下,在光波距离(国际认可的25厘米)处的人眼的分辨率大约等于1/10mm。为了观察两条直线,由于直线可以刺激一系列神经细胞,因此可以改善眼睛的分辨率。

人眼的分辨率仅为1/10mm,因此人眼无法区分小于1/10mm或两个小物体的物体之间的距离,比1/10mm靠近。因此,已经有一个简单的宏观放大玻璃到光学显微镜上进行显微镜观察,然后是电子显微镜。显微镜分辨率的定义是指两个小点之间的最小距离,这些距离可以在样品上明确区分。计算公式是:

d =0.61λ/na

其中:D是分辨率(UM); λ是光源(UM)的波长; Na是物镜的数值孔径(也称为透镜孔径比)。

根据公式,显微镜的分辨率取决于入射光源的波长和匹配的物镜的数值光圈。可以看出,改善光学显微镜的方法:

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1.增加物镜镜头的数值孔径NA。

数值孔径na = n*sin(u)

在公式中,n是物镜和样品之间介质的折射率。 u是物镜镜头的光圈角的一半。因此,这是通过适当地采用较大的光圈角或从光学设计增加折射率来增加光学显微镜分辨率的最常见方法。通常,低放大目标(例如低于10倍)使用空气作为介质,折射率为1,即干燥目标;浸入水培养基为蒸馏水,其折射率为1.33;油浸入物镜是雪松油或其他透明油,其折射率平均为1.52左右,靠近镜头和玻璃滑梯的折射率,例如Olympus 100x油镜。浸入水物镜和油浸入物镜不仅具有很高的放大倍率,而且还增加了由于使用高折射率培养基而增加了物镜的分辨率。

2.降低光源的波长。

可见光的最短波长为390nm。如果将此波长的紫外线用作照明源,则光学显微镜的分辨率可以还原为0.2UM。但是,由于最常见的玻璃材料吸收了大量的光,波长低于340nm,因此紫外线在大量衰减后无法形成清晰明亮的图像。因此,必须使用昂贵的材料,例如石英(可以发射低至200nm的紫外线)和氟酸盐(可以传输低至185nm的紫外线),并且在裸眼甚至还无法观察到紫外光显微镜除了高成本之外,观察到的样本还没有广泛使用,因为其自身的局限性,这种改善显微镜分辨率的方法并未广泛使用。


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